PROTOCOLO DE TRES FORMAS DETINCIÓN DIFERENCIAL PARA EL ANÁLISIS DE ICH EN TRES DIVISIONES CELULARES SUCESIVAS EN MÉDULA ÓSEA DE RATON in vivo
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Resumen
de las cromatidas hermanas en tres tonos. Los ratones fueron inyectados dos veces intraperitonealmente con bromodesoxiuridina (BrdU) adsorbida en carbón activado; la primera dosis al tiempo cero (primer ciclo celular) se varió entre 0.1 y 0.25 mg de BrdU por gramo de peso y una segunda dosis a las 8 horas (segundo y tercer ciclos celulares) con 1 .O, 1.33 6 1.5 mg de BrdU por gramo de peso corporal.
Los animales fueron inyectados con colchicina (¡.p.) dos horas antes de su sacrificio a las 35 h. Las laminillas obtenidas por la técnica usual fueron teñidas siguiendo el método de fluorescencia más Giemsa. Se cuantificaron las cClulas con buena o pobre aiferenciación y en algunos casos la frecuencia de ICH, en tres divisiones subsecuentes.
Los resultados indican que el mayor porcentaje de células con sus cromatidas hermanas teñidas en tres tonos se obtuvo con una combinación de dosis de 6.2 y 1.5 mg de BrdU/g
de peso para la primera y segunda dosis, respectivamente. La frecuencia de ICHs tan baja que se observó en el primer ciclo de división (0.31-0.46) probablemente aumente la sensibilidad
para detectar el efecto mutagénico mediante el análisis de ICH. Este método puede ser usado para determinar in viuo la persistencia de lesiones involucradas en la producción
de ICH y el efecto sinérgico entre la acción de los mutágenos y la BrdU incorporada al ADN.
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